紫外可见光分光光度计是使用紫外光谱特点而设计制造的光学仪器。紫外光谱基础部分知识参考二知了文章:一文略遍紫外光谱中那些关键知识点。世界首台紫外可见光分光光度计诞生于1918年的美国国家标准局，广泛应用于医疗卫生、化学化工、环保、地质、机械、冶金、石油、食品、生物、材料、计量科学等各个领域。
紫外可见光分光光度计工作原理
紫外可见光分光光度计工作原理与红外光谱、拉曼光谱的工作原理近似，采用一定频率的紫外可见光照射所需检测的物质，引起物质中电子跃迁，从而表现出随着吸收波长变化而引起的光谱变化，记录光谱变化形成分析数据。
朗伯-比耳定律(Lambert-Beer)是光吸收的基本定律，俗称光吸收定律，是分光光度法定量分析的依据和基础。当入射光波长一定时，溶液的吸光度A是吸光物质的浓度C及吸收介质厚度l(吸收光程)的函数。凡具有芳香环或共轭双键结构的有机化合物，根据在特定吸收波长处所测得的吸收度，可用于药品的鉴别、纯度检查及含量测定，既可以定性分析，又可以定量分析。
紫外可见分光光度计的基本结构
紫外可见光分光光度计使用的波长范围为紫外光区200-400nm和可见光区400-850nm。仪器主要结构包括:辐射源(光源)、色散系统、检测系统、吸收池、数据处理器、自动记录器、显示器等部件。由光源发出连续辐射光，经单色器形成单色光。单射光照射吸收池，再经光经检测器光电管将光强度转变成电信号，再经显示系统，完成测定。
1)、光源:钨灯或者氘灯
最常见的电源为钨灯或者氘灯。钨灯发射波长为325~2500nm，适宜使用波长为320~1000nm，因此，钨灯也可作近红外光源。钨灯工作电压是12V，也可使用12V直流电源供电，电源电压的微小波动都会引起钨光强度的很大变化，使用过程中必须稳压电源供电，钨灯工作时间为10000小时以上。使用仪器:7230型、754型分光光度计等。
氘灯发射波长为190~400nm，适宜使用波长为190~360nm，使用中也需提供稳压电源，氘灯的使用寿命:国产的一般为500~800小时，进口的一般为1000小时，少数的能达到2000小时。最新的仪器采用高强度和高单色性的激光作为紫外光源。
2)、单色器:棱镜单色器或光栅单色器
单色器是将连续光谱分解成单色光，并能够准确发射目标所需要的单一波长的光，是整个仪器最关键的部件。单色器由狭缝、色散元件和透镜系统组成，关键部件为色散元件，常用为棱镜、光栅，或者是两者的组合。现阶段，光栅以及组合使用频率最高。
棱镜单色器由玻璃或石英制成，玻璃棱镜存在吸收紫外光，不宜用于紫外光区。石英棱镜工作波长为185~4000nm，波长越短，色散程度越好，越趋向长波，色散程度越差。石英棱镜在紫外光区可达到0.2nm，而在长波段，只能达到5nm。光栅单色器为一系列等宽、等距离的平行狭缝，光栅单色器的分辨率精确到0.2nm且波长范围比棱镜单色器范围宽。
3)、吸收池
吸收池，又称比色皿，用于盛装待测液并决定待测溶液透光液层厚度的器皿，常为长方体，也有圆形或其他形状。底面和两侧为毛玻璃，另外两侧为光学透明面。比色皿材质为石英，吸收池规格包括:0.5cm、1.0cm、2.0cm、3.0cm、5.0cm等。
4)、检测器
将光信号转变为电信号装置称为检测器。测量吸光度并不是测量透过吸收池的光强度，而是将光强度转换成电流进行测量，此种光电转换器件称为检测器，又叫接受器。常用的检测器有光电池、光电管、光电倍增管及光电二极管阵列检测器等。目前，高档分光光度计中一般采用光电倍增管作为检测器。光电二极管阵列检测器是紫外可见分光光度计检测的一个重要进展，代表了最新的发展水平。
5)、信号显示系统
将检测器输出的信号放大，并显示出来的装置。旧型号分光光度计采用检流计、微安表作显示装置，直接读出吸光度或透光率;现阶段，多采用数字电压表等显示，并用记录仪直接绘制出吸收(或透射)曲线，并配有计算机数据处理器等。
紫外可见分光光度计的使用注意事项
1)、紫外可见分光光度计在开机前将样品室内的干燥剂取出，仪器自检过程中禁止打开样品室盖。
2)、吸收池必须洁净，并注意配对使用。量瓶、移液吸管均应校正、洗净后使用。比色皿内溶液以皿高的2/3~4/5为宜，不可过满以防液体溢出腐蚀仪器。测定时应保持比色皿清洁，池壁上液滴应用擦镜纸擦干，切勿用手捏透光面。测定紫外波长时，需选用石英比色皿。吸收池放入样品室时应注意方向相同。用后用溶剂或水冲洗干净，晾干防尘保存。
3)、测试品标注测试物质以及配置浓度，且吸收度在0.3~0.7之间为宜。测试中，因采用测试品溶剂为空白对照:1cm石英吸收池，由仪器规定波长或者规定的吸收峰±2nm以内自动扫描测定，测吸收度以核对测试品吸收峰位置是否正确。
4)、选用仪器的狭缝宽度应小于供试品吸收带的半宽度，否则测得的吸收度值会偏低，狭缝宽度的选择应以减少狭缝宽度时供试品的吸收度不再增加为准，对于大部分被测品种，可以使用2nm缝宽。
5)、实验结束后将比色皿中的溶液倒尽，然后用蒸馏水或有机溶剂冲洗比色皿至干净，倒立晾干。关电源将干燥剂放入样品室内，盖上防尘罩，做好使用登记。
紫外可见分光光度计的选型
1)、可见分光光度计，紫外分光光度计和紫外可见分光光度计区别:可见分光光度计中可见光波长范围在400~1000nm，紫外分光光度计中紫外光波长范围是200~400nm，两者测定波长范围不同。而紫外可见分光光度计，可以通过更换光源分别形成可见和紫外光区，测定的波长在200~1000nm。
2)、选择可见光和紫外可见光分光光度计所需要考察的关键指标包括:1)、测量波长范围;2)、测定波长准确度;3)、杂散光参数。波长范围越宽、波长准确度值和杂散光参数值越低，表示仪器的越能越好。
3)、可见分光光度计和紫外可见光分光光度计型号:可见分光光度计型号包含721系列，722系列和723系列。721系列有721/721-100型，测定波长为360-800nm。722系列中，722型波长330-1000nm，722S与722N的波长范围325-1000nm，722N是自动调节波长。723系列有723/723N/723PC/723PCS型四种，测定波长为320-1000nm，其中723是手动调整波长，723N是自动调波长，723PC配有扫描软件，723PCS带有扫描软件和打印机。紫外可见分光光度计最常见的是UV752/UV752N，波长范围是195nm-1020nm。
4)、紫外分光光度计按照光源种类划分为:(1)、传统单光束UV紫外测试，测试过程全程封闭，单光束光源只通过光栅直接照射样品，再经光电倍增管检测器检测。测试空白样品之后才能测试目标样品，全波段需要时间最长为2min;(2)、比例双光束UV，测试过程全封闭，单光束光源通过光栅，再经棱镜，分成2束UV，分别照射目标样品与空白样品，再合并光进入光电倍增管检测器检测，经差减法得到结果。目标样品与空白样品可以同时测量，测试灵敏度降低，全波段分析时间长。
(3)、双光束UV:与比例双光束UV不同之处是通过棱镜分出两道光后，在分别通过光栅，各自分别进入光点倍增管检测器检测。加强了灵敏度，同时保留同时测量空白样品与目标样品的优点，全波段分析时间长。(4)、全波段UV:样品与空白样品可以暴露在空气中，照射样品后，进入密闭箱，通过光栅，进入DAD检测器检测。检测样品不需要密闭，外界光线对测试无影响，使用方便准确且空白只需要检测一次，全波段分析时间小于1s。
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